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Caracterización y Susceptibilidad antimicrobiana de Vibrio Spp.Aislado de diferentes ambientes

Monday, May 5th, 2008

INTRODUCCIÓN
El género Vibrio consta de Gram-negativos barras rectas o curvas, la movilidad a través de un único flagelo polar.Vibrios son capaces de tanto respiratorio y el metabolismo fermentativo.O2 es un aceptor de electrones universal, ya que no se desnitrificar.La mayoría de las especies son oxidasa-positivos.En la mayoría de los medios de vibriones están relacionadas con bacterias entéricas, pero comparten algunas propiedades con pseudomonads un pozo.La familia Vibrionaceae se encuentra en el "Facultatively anaerobios Gram-negativos Cañas" en el Bergey's Manual (1986), sobre el nivel de la familia Enterobacteriaceae.En la taxonomía de los revisionistas de 2001 (Bergey's Manual), basado en el análisis filogenético, Vibrionaceae, Pseudomonadaceae y enterobacterias son todos aterrizó en el Gammaproteobacteria.Vibrios se distinguen de enterics por ser oxidasa-positivos y móviles por medio de flagelos polares.Vibrios se distinguen por ser de pseudomonads fermentativa, así como en su metabolismo oxidativo.De los vibriones que son clínicamente significativos a los seres humanos, Vibrio cholerae, el agente del cólera, es la más importante.

La mayoría de vibriones tienen relativamente simple factor de crecimiento y las necesidades crecerán en la síntesis de glucosa con los medios de comunicación como única fuente de carbono y energía.Sin embargo, desde vibrios son normalmente organismos marinos, la mayoría de las especies requieren 2-3% NaCl o una base de agua de mar para un desarrollo óptimo.Vibrios nutricionales varían en cuanto a su versatilidad, pero algunas especies crecerá en más de 150 diferentes compuestos orgánicos como fuente de carbono y energía, que ocupan el mismo nivel de versatilidad metabólica como Pseudomonas.En medios líquidos vibrios son móviles por flagelos polares que están encerradas en una vaina continua con la membrana externa de la pared celular.En medios sólidos pueden sintetizar numerosos flagelos laterales que no están forrados.

Vibrios son uno de los organismos más comunes en las aguas superficiales del mundo.Que se produzcan tanto en los hábitats de agua dulce y marinos y en las asociaciones con los animales acuáticos.Algunas especies son bioluminiscentes y viven en asociaciones mutualistas con los peces y otras formas de vida marina.Otras especies son patógenas para los peces, anguilas y ranas, así como de otros vertebrados e invertebrados.V. cholerae y V. parahaemolyticus son patógenos de los humanos.Ambos producen diarrea, pero en formas que son completamente diferentes.V. parahaemolyticus es un organismo invasoras que afectan principalmente al colon; Cholerae es no invasivo, que afecta el intestino delgado a través de la secreción de una enterotoxina.Vibrio vulnificus es un patógeno emergente de los seres humanos.Este organismo causa infecciones de heridas, gastroenteritis, o un síndrome conocido como "septicemia primaria".

METODOLOGÍA
EXPERIMENTO: 1
Recogida de Muestras (Collins et al, 1973):
Marina Las muestras fueron recolectadas en diferentes lugares de la región marina Rameshwaram (bahía de Palk) a una profundidad de 1 — 2 m en diversos lugares.Alcantarillado y se recogieron muestras de suelo en y alrededor de GRD College campus.

EXPERIMENTO: 2
2,1.La enumeración bacteriana (María et al, 1985):
Número de cultivable, aeróbica, bacterias heterótrofas presentes en el agua y muestras de sedimentos se determinó mediante chapado de marina agar agar nutriente.Para los marinos aislados, los medios de comunicación fueron preparados por el 3,5% de cloruro de sodio (NaCl).Entonces, la chapada fueron incubados a temperatura y tiempo apropiados.

EXPERIMENTO: 3
3,1.Aislamiento de Vibrio spp de muestras de agua y sedimentos (María et al, 1985):
Diferentes medios selectivos se utilizaron para el aislamiento de Vibrio sp de fuentes marinas.Para los marinos aislados, los medios de comunicación fueron preparados por el 3,5% de cloruro de sodio (NaCl).Medios utilizados para el aislamiento de Vibrio sp son 1.Sacarosa Thiosulfate Citrate Bile Agar (con 3,5% de NaCl) 2.Agar del medio marino;

EXPERIMENTO: 4
4,1 Identificación
Microscopía: tinción de Gram y características de morfología celular se determinaron por métodos estándar (Gerhardt et al., 1981).Motilidad se observó en mojado montar utilizando microscopio.
Características culturales: Colonia de la morfología de las distintas cepas de Vibrio sp se observaron en nutrientes de agar, Thiosulfate Citrate Bile Agar sucrosa (TCBS), agar sangre, agar Mac conkey, Manitol sal agar y los resultados fueron tabulados. Fisiológicas
caracterización: Preliminar caracterización fisiológica como prueba de catalasa, prueba de la hidrólisis del almidón, prueba de indol, MRVP prueba, citrato de prueba, prueba de oxidasa, la cadena de pruebas, la prueba de fermentación de hidratos de carbono (azúcares utilizados en sacarosa, lactosa, glucosa, maltosa, manitol), el cólera se llevaron reacción roja A cabo y los resultados fueron tabulados.

EXPERIMENTO: 5
de Lucha contra la susceptibilidad microbiana prueba método de Kirby-Bauer
Procedimiento:
1.Hacer una suspensión en una turbidez de la cultura bacteriana someterse a la prueba.
2.Coloque una torunda de algodón estéril en la suspensión bacteriana y eliminar el exceso de líquido presionando y rotando el algodón contra el interior del tubo por encima del nivel de líquido.El hisopo se sembró en al menos tres direcciones sobre la superficie de la Mueller-Hinton agar TCBS y agares obtener crecimiento uniforme.Un último barrido se realiza en todo el borde de la agar.Asegúrese de streak para confluency.
3.Dejar secar las placas durante cinco minutos.
4.El uso de fórceps estériles, el lugar que contiene los siguientes discos de antibióticos en el plato: penicilina G, ampicilina, cephalothin, eritromicina, la tetraciclina, la meticilina, estreptomicina o de otros discos de los antibióticos apropiados.
5.Incubar las placas dentro de los 15 minutos después de la aplicación de los discos.Las placas deben ser incubadas poco después de la colocación de los discos ya que la prueba es el mismo en condiciones en las que la difusión de los antibióticos y el crecimiento bacteriano comenzará aproximadamente en el mismo tiempo.
6.Después de un día de incubación, medir el diámetro de la zona de inhibición del crecimiento alrededor de cada disco a la unidad más próxima mm.Examinar cuidadosamente las placas para bien desarrollado colonias dentro de la zona de inhibición.
7.Con un pie de la tabla de sensibilidad antibiótica, determinar si la cepa es resistente, intermedio, o susceptibles a los antibióticos probados.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Totalmente 35 muestras se recogieron en diferentes localidades de la región marina, en un suelo de jardín , El agua y las aguas residuales domésticas son water.Vibrio bacterias gram-negativas y, en gran medida halófilos.Vibrio es forma de vara, y puede ser recto o curvo.Son organismos móviles, utilizando un único flagelo polar para viajar.Vibrios son uno de los organismos más comunes en las aguas superficiales del mundo.Que se produzcan tanto en los hábitats de agua dulce y marinos y en las asociaciones con los animales acuáticos.Algunas especies son bioluminiscentes y viven en asociaciones mutualistas con los peces y otras formas de vida marina.Estas muestras fueron procesadas a través de los procedimientos de uso común, como medios selectivos (que se enumeran más adelante), la tinción de Gram, para la observación de montaje húmedo motilidad y bio químicos incluye ensayos de prueba de catalasa, prueba de la hidrólisis del almidón, prueba de indol, MRVP prueba, citrato de prueba, oxidasa Prueba, cadena de prueba, prueba de la fermentación de hidratos de carbono (azúcares utilizados en sacarosa, lactosa, glucosa, maltosa, manitol), el cólera rojo reacción se llevaron a cabo y los resultados fueron tabulados para la identificación de Vibrio sp de las anteriores muestras, y que se pueden procesar, la Detalles de la descripción, como se muestra

COLONY MORFOLOGIA DE Vibrio sp.
MEDIA DETALLES
Nutrient agar húmedo, traslúcido, regular, en forma de disco, 1-2 mm de tamaño, tinte azulado puede verse en la transmisión Luz como color distintivo
Mac Conkey agar Incoloro colonias después, la incubación prolongada de color rosa se observaron colonias.(Placa: 2)
agar sangre colonias se vieron rodeados por una zona de hemólisis
Tiosulfato citrato sales biliares agar colonias son de color amarillo debido a la fermentación.
Manitol sal agar No se observó crecimiento destacado.

La colonia morfología cepas de Vibrio fue variando durante el aislamiento en los medios selectivos.Las colonias son muy claras, húmedo, en forma de disco, el amarillo y el rosa se observaron colonias de diversas fuentes.La madre fue la cultura sub cultivadas en los mismos medios de comunicación para la cultura de mantenimiento.Todas las cepas de Vibrio aisladas fueron numeradas para la fácil identificación y conveniencia.La tinción de Gram se registró reacción de calor fijos frotis de Vibrio cultura.Motilidad celular y forma se determinaron por la observación directa de los montes húmedo dulce caldo de cultivo utilizando la microscopia.El chacteristics de Vibrio en medio TCBS muestra que la mayoría de los aislados fueron la movilidad y capaz de producir pigmentación amarilla y verde.Tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa (TCBS) agar (Difco) es un medio selectivo de uso común para aislar a los miembros del género Vibrio de medio ambiente de los estuarios.La alta concentración de tiosulfato y citrato y la fuerte alcalinidad del medio en gran medida inhibir el crecimiento de Enterbacteriaceas.Oxbile y reprimir cholate primaria enterococos. Las bacterias coliformes, que puede crecer, no puede metabolizar la sacarosa.Sólo unos pocos sacarosa proteasa cepas pueden crecer a partir de amarillo, como vibriod colonias.El indicador mixto azul timol, bromothymol cambia de color de azul a amarillo, cuando el ácido se forma incluso en este medio fuertemente alcalino
De las 35 muestras recogidas diferentes, sólo 17 estaban dando muestras de la presencia de Vibrio sp, la mayoría de las muestras marinas Recogidos de las diversas regiones marinas muestra resultados positivos para Vibrio sp, en comparación con otras muestras de las aguas residuales, como el agua y el suelo muestras.Y en caso de la muestra de agua de uso doméstico (agua del grifo y agua mineral), muestra la ausencia de Vibrio cepa.Vibrios son habitantes de ambientes acuáticos.Ellos ocasionalmente infectar a los humanos, causando enfermedades intestinales o extraintestinales.Las más frecuentes las enfermedades causadas por vibriones son los que están bien informado, incluido el cólera y otras formas de gastroenteritis aguda.Además, puede haber otros muchos de enfermedades causadas por Vibrio que no se denuncian algunos de los determinantes de virulencia de Vibrio spp.Son bien conocidas.

ENUMERATION BACTERIANA DE POBLACIÓN
El total de la población de bacterias se observó y se enumeran en el medio marino y placas de agar placas de agar nutriente.El Vibrio colonias aisladas y se enumeran en un medio TCBS.Ambas poblaciones fueron contados y se muestra

Listado total de la población bacteriana y Vibrio contar.
S. SIN LUGAR totales de bacterias Vibrio Población Población
1 Marine región 105 65 × 108 × 102
2 Jardín Suelo 106 21 × 142 × 102
3 de agua de Aguas Residuales de 161 × 106 42 × 102
4 El agua del grifo TFTC 0
5 Agua mineral TFTC 0

características fisiológicas de Vibrio sp
BIO QUÍMICA DE PRUEBA NO
POSITIVES DE NO
NEGATIVES
OXIDASE PRUEBA 16 1
NITRATO DE PRUEBA 16 1
CATALASA PRUEBA 8 9
INDOLE PRUEBA 17 0
METHYL RED PRUEBA 17 0
VOGES PROSKEUAR 5 12
STRING PRUEBA 17 0
CÓLERA RED RXN 4 13
CITRATO PRUEBA 7 10
ALMIDÓN HYDROLYSIS 0 17
HEAMOLYSIS 5 12
sacarosa 15 2
MANNITOL, ÁCIDO 16 1
lactosa 0 17
GLUCOSA, ÁCIDO 17 0
GLUCOSA, GAS 1 16
MALTOSE 16 1

Al observar los resultados de las pruebas fisiológicas, la mayoría de Las pruebas han sido positivas para el Vibrio cholerae.The aislamientos que mostraron resultados positivos para el Vibrio cholerae fueron principalmente aisladas de medio ambiente marino, en comparación con otras muestras de las aguas residuales, como el agua y el suelo muestras.A través de este resultado se observó que Vibrios son habitantes de ambientes acuáticos.Animales marinos puede perjudicar a los seres humanos de diversas maneras.Algunos animales sufran daños por la inducción de la infección.Estas infecciones orales resultado cuando las bacterias se introducen en los tejidos de las víctimas que son mordidos.Las bacterias presentes en los tejidos de animales marinos pueden causar infección cuando son ingeridas.Además, la propia agua de mar contiene bacterias, de manera que la piel y las lesiones de tejidos blandos expuestos a agua de mar puede llegar a ser inyectado en segundo lugar.

Kirby-Bauer-Disco Difusión Método: antibióticos disco Susceptibilities
La mayoría de los aislados de origen marino Fueron muy incidencia de la resistencia a los antibióticos era evidente contra la amoxicilina, Ampicillin, Carbencillin y Cefuroxime seguido por Rifampicina y Estreptomicina más de las muestras de suelos y de aguas residuales.Sin embargo, la resistencia a los antibióticos fue menor contra el cloranfenicol, tetraciclina, penicilina G, Nalidixicacid, gentamicina Sulphafurazole, Trimethoprim, Neomycin y amikacina.Esto puede deberse al hecho de que las bacterias terrestres entrar en el agua de mar con plásmidos resistentes a los antibióticos pueden ser responsables de la prevalencia de la resistencia en los genes en el medio ambiente marino.Sin embargo, hay pocos informes disponibles sobre adquirido resistencia a los antibióticos contra la ampicilina (68%), cefuroxima (66,7%), amikacina (55%), kanamicina (58,8%) y trimetoprim (76,7%) en Sparus sarba en China.Se puede presumir que los factores antropogénicos (efluentes hospital) podría haber influido en la adquisición de resistencia de Vibrio spp debido a estos antibióticos, ya que no existen informes disponibles sobre el uso de estos fármacos para la acuicultura en la India.Sin embargo, los resultados de nuestro presente estudio servirá como una base de datos para futuras investigaciones sobre la magnitud de la resistencia a los antibióticos, lo que puede ser revelado a través de plásmidos de aislamiento, la eficiencia y la transformación de sus experimentos de conjugación.Resultados de la incidencia de la resistencia a los antibióticos en múltiples Vibrios puede mejorar nuestro conocimiento sobre las cepas resistentes a los fármacos y su efecto en el futuro de la terapia de camarones, así como enfermedades humanas.Por lo tanto, el uso sin escrúpulos de los antibióticos contra las enfermedades se debe evitar y las restricciones para el uso de los antibióticos pueden ser aplicados por una política de antibióticos a nivel nacional para la India.

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